Nella determinazione differenziale degli enterobatteri e di alcuni vibrioni, la reazione di Voges-Proskauer occupa un posto speciale. Il test si basa sulla capacità dei batteri di fermentare il glucosio per formare acetoina.
L'essenza del processo di ricerca
In microbiologia, la reazione di Voges-Proskauer è spesso usata per differenziare all'interno della famiglia Yersinia di enterobatteri (compresi i patogeni di pseudotubercolosi ed enterocolite), Escherichia coli e aerobi sporigeni. Il risultato viene visualizzato colorando il mezzo quando vengono aggiunti determinati reagenti.
Questo test appartiene alla serie IMViC (abbreviazione di Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - un gruppo di test di identificazione che include definizioni differenziali:
- con indolo, basato sulla scomposizione del triptofano in indolo, utilizzato in presenza di un reagente Kovacs o Ehrlich;
- usandometilroth, o metil rosso, che rileva un dato pH come risultato della metabolizzazione del glucosio;
- Reazioni di Voges-Proskauer per la rilevazione dell'acetil-metilcarbinolo;
- utilizzo del citrato con viraggio di colore dovuto all'alcalinizzazione del mezzo.
L'essenza del processo è la visualizzazione della presenza di batteri diagnosticati a causa dell'interazione dell'acetoina da loro formata con la potassa caustica in presenza di ossigeno. L'acetil-metilcarbinolo viene ossidato a diacetile, che forma un composto rosso brillante o rosa. Aumenta la sensibilità del test introducendo l'alfa-naftolo prima di aggiungere la potassa caustica.
Impostazione del test
La formulazione della reazione Voges-Proskauer prevede la coltivazione preliminare di microrganismi. Una coltura pura viene seminata sul mezzo diagnostico differenziale di Clark, una variante del quale è il brodo di Clark (senza l'aggiunta di agar-agar). Viene utilizzato un mezzo già pronto o preparato in modo indipendente. Gli ingredienti includono:
- 5g di peptone;
- 5g di glucosio;
- 5g di fosfato di potassio bibasico;
- 1L di distillato.
Durante lo studio, la coltura viene inoculata con un'ansa batteriologica sterile in un mezzo liquido. Quantità - 5 ml in una provetta più controllo. L'incubazione viene effettuata a una temperatura di 35-37 gradi per due giorni. Successivamente, viene condotto uno studio della reazione Voges-Proskauer per fasi:
- 2, 5 ml di brodo di coltura vengono trasferiti in una provetta sterile.
- Aggiungere sei gocce di alfa-naftolo (soluzione alcolica al 5%).
- Aggiungi 40%una soluzione di potassio caustico in una quantità di 0,1 ml, o due gocce.
- L'agitazione viene eseguita agitando delicatamente la provetta.
- Valuta il risultato dopo 15 minuti dall'inizio dell'esperimento.
Un metodo di prova alternativo è l'incubazione notturna, il cui tempo è ridotto a 18 ore o fino a un giorno. Oltre a questo metodo viene utilizzato anche un test rapido: si introduce una coltura in un'ansa in 2 ml di terreno, si incuba per circa quattro ore, quindi si aggiungono i reagenti in pari quantità di 2-3 gocce, si mescola e si il risultato viene valutato dopo dieci minuti.
Il controllo è uno degli agenti causali della polmonite Klebsiella pneumoniae - ceppo atcc 13883.
Valutazione del risultato
Dopo il tempo necessario dopo l'aggiunta dei reagenti (da 5 a 15 minuti), si dovrebbe osservare un colore rosso ciliegia con una reazione positiva pronunciata, rosso e rosa - con una reazione positiva debole. Nessuna modifica viene registrata come risultato negativo.
L'eccesso di potassa caustica in una soluzione può dare un'imitazione di una reazione positiva, colorando in un colore rame. In questo caso va registrata la risposta negativa della colonia testata. Inoltre, la colorazione del rame appare nei casi in cui la valutazione viene fornita un'ora dopo l'introduzione dei reagenti.
Quando si valuta il risultato, si deve tenere conto del fatto che la coltivazione prolungata dei microrganismi studiati (più di tre giorni) porta all'acidificazione del mezzo, che può portare a un esito errato dello studio. La reazione può essere leggermente positiva ofalso negativo.
Requisiti per i reagenti del test
I reagenti Voges-Proskauer devono soddisfare requisiti quali la corretta concentrazione, elevata purezza e stabilità, che si ottengono attraverso una corretta conservazione.
I kit di test pronti all'uso in genere contengono reagenti per 100 o più utilizzi e sono disponibili in fiale di plastica o di vetro colorato. La qualità è regolata dalla relativa documentazione.
