La varietà delle infezioni batteriche richiede una chiara identificazione del patogeno e la definizione della sua specie. Per determinare il tipo di microrganismo, i microbiologi sono aiutati dalle sue proprietà tintoriali: la suscettibilità del microbo alla colorazione con vari coloranti. Questo metodo consente di esplorare la morfologia dell'agente patogeno. Le proprietà tintoriali dei batteri sono di grande importanza per la ricerca pratica e teorica nel campo della microbiologia.
Ricerca microbica
In batteriologia, ci sono molti metodi per colorare i microrganismi. Tutti loro si basano sulle proprietà tintoriali dei batteri. La colorazione consente di determinarne la forma, la struttura, le dimensioni, la posizione relativa. Ciò consente di risolvere i problemi di sistematizzazione dei tipi di microrganismi della biologia generale e della microbiologia comparata.
Perché dipingerli
I batteri sono praticamenteorganismi trasparenti e, senza l'uso della colorazione, sono poco visibili per la microscopia convenzionale. È possibile utilizzare tipi speciali di microscopia (contrasto di fase, campo scuro) per studiare gli oggetti, ma il modo più semplice è colorarli, dopodiché i batteri diventano visibili in un microscopio ottico convenzionale.
Preparazione del campione
Indipendentemente dalla tecnica di colorazione utilizzata, esistono regole uniformi per la preparazione dell'oggetto in studio. Le seguenti fasi sono obbligatorie:
- Gli strumenti sterili fanno una macchia su un vetrino.
- Il campione viene asciugato. Questo viene fatto a temperatura ambiente o utilizzando armadi di essiccazione.
- Segue la fase di fissazione: i microrganismi vengono attaccati al vetro con composti speciali.
- Colorazione corretta: il campione viene ricoperto di colorante per un determinato periodo di tempo, dopodiché viene lavato via.
- Asciugatura finale: il campione viene nuovamente asciugato.
I coloranti più comuni
I coloranti più comunemente usati sono a base di anilina con diversi valori di acidità (pH). La maggior parte dei coloranti sono polveri diluite in alcool.
I coloranti in cui i cationi sono i coloranti sono detti basici (pH maggiore di 7). Possono essere utilizzati per colorare i microrganismi nei colori rosso (magenta, safranina), viola (viola di metile, tionina), blu (blu di metilene), verde (verde malachite), marrone (crisoidina) e nero (indulina).
I coloranti, in cui i coloranti sono anioni, sono detti acidi (pH inferiore a 7). Coloreranno il campione di rosso (eosina), giallo (picrin) o nero (nigrosina).
Esiste un gruppo di coloranti neutri (ad esempio, rodamina B), in cui sia i cationi che gli anioni agiscono come agenti coloranti.
Cultura viva o morta
I metodi di colorazione sono divisi in due gruppi in base alla forma di vita del provino.
- Colorazione vitale (a vita). Questo metodo di studio delle proprietà dei microrganismi viene utilizzato nello studio dei tessuti viventi, il che consente di osservare i processi vitali dei microbi. Per questa colorazione vengono utilizzati coloranti a bassa tossicità e ad alto potere penetrante.
- Colorazione post-vitale. Questa è la colorazione di microrganismi morti o uccisi. Grazie alle proprietà tintoriali dei batteri, i microbiologi determinano la loro struttura. È questa colorazione quella più utilizzata.
Gram-positivi e Gram-negativi
Sono queste caratteristiche dei batteri che si possono trovare nelle istruzioni per vari medicinali. Questo metodo di studio delle proprietà tintoriali dei batteri si basa sull'uso del colorante violetto di genziana e sulla fissazione dello iodio. Questa è la tecnica di Hans Christian Gram, un medico danese che la propose nel 1884. Come risultato di questa colorazione, i batteri sono divisi in due gruppi:
- Grammo (+) - diventa blu(stafilococchi e streptococchi).
- Grammo (-) - colorazione da rosa a rossa (enterobatteri, salmonella, E. coli).
Diversi risultati di colorazione sono dovuti alle diverse proprietà tintoriali delle pareti batteriche. Il metodo della colorazione di Gram è ancora il principale nella diagnosi di alcune malattie infettive.
Altre tecniche di colorazione
Descriviamo alcuni altri metodi ampiamente utilizzati in batteriologia.
- Metodo Ziehl-Nelson - determina la resistenza agli acidi dei batteri. Identifica gli agenti causali della tubercolosi e della micobatteriosi.
- Tecnica Romanovsky-Giemsa - colora di rosso i batteri acidofili (acido acetico e acido lattico) e di blu basofili (spirochete e protozoi).
- La tecnica di Morozov - colora i batteri di marrone e rende visibili i loro flagelli.
Le spore possono essere viste
La colorazione fuccina di Tsiel ti consente di vedere le spore batteriche. Avendo un colore rosa dopo la colorazione, sono chiaramente visibili sullo sfondo dei batteri blu. Questo metodo è anche uno strumento di batteriologia ed è di grande importanza pratica.
