Questo articolo sarà dedicato al fenomeno della reazione di precipitazione. Qui considereremo le caratteristiche della formulazione di questo fenomeno, il fenomeno della diffusione, le caratteristiche generali, il ruolo nella vita umana e molto altro.
Introduzione al fenomeno
La precipitazione è un fenomeno di tipo sierologico, durante il quale gli antigeni solubili interagiscono con gli anticorpi e, di conseguenza, si osserva una precipitazione - un precipitato.
La caratteristica generale della reazione di precipitazione è una forma di influenza coordinata di antigene e anticorpo. Questi tipi di interazioni consentono di determinare la presenza di antigeni sconosciuti nella sostanza in esame aggiungendo anticorpi e antigeni noti. Il processo di precipitazione senza la presenza di sali procederà peggio e l'optimum migliore si trova nell'intervallo 7,0-7,4 pH.
Componenti di una reazione
Ci sono tre elementi principali tra i componenti della reazione di precipitazione:
- Un antigene di natura molecolare. È nello stato di tipo fine, in altre parole, essosolubile. Inoltre, un tale antigene è chiamato precipitogeno, che è un lisato o estratto di tessuto, ecc. Un precipitogeno ha una differenza caratteristica da un agglutinogeno, che risiede nella dimensione delle particelle di cui è costituito. L'agglutinogeno ha una dimensione cellulare intrinseca e i precipitogeni sono commisurati alle dimensioni della molecola. La soluzione antigenica è caratterizzata da trasparenza.
- Un anticorpo trovato nel siero del sangue umano, così come nel siero diagnostico immunitario, che contiene gli anticorpi studiati.
- Gli elettroliti sono soluzioni di cloruro di sodio che sono isotoniche.
Produzione di precipitatogeni
Impostare una reazione di precipitazione è impossibile senza un precipitogeno, che si ottiene macinando materiali ed estraendo da essi antigeni proteici. L'estrazione avviene mediante ebollizione o altri metodi.
I lisati, nonché estratti di tessuti e organi, siero del sangue, vari tipi di filtrati a base di colture microbiche in brodo, nonché estratti salini di microrganismi e sostanze autolisate, sono un notevole esempio di precipitogeni.
Precipitazioni
Ora consideriamo il metodo per impostare la reazione di precipitazione.
Viene eseguita una reazione di precipitazione ad anello, che avviene in provette appositamente preparate. Il siero viene introdotto nella cavità dei piatti, versandolo sul muro con l'aiuto di una pipetta. Successivamente, la quantità appropriata di precipitatore viene accuratamente stratificata sopra, quindi il tubo viene portato in posizione verticale da una orizzontale. L'impostazione e la presa in considerazione della reazione di precipitazione è un'operazione molto meticolosa. Il risultato viene registrato dopo la comparsa di un anello bianco sul confine tra l'antigene e l'anticorpo. Se gli elementi reagenti della reazione corrispondono tra loro, si legano, ma questo diventa evidente dopo un lungo periodo di interazione
La reazione di precipitazione viene condotta anche in una capsula di Petri o su un bicchiere diapositiva, dove viene trasferito il gel di agar, applicandolo in un piccolo strato. Dopo che si è indurito nel gel, viene ritagliato un piccolo numero di pozzetti in cui verranno inseriti antigeni e anticorpi. Esistono due modi per eseguire questa azione: il metodo dell'immunodiffusione radiale e la doppia immunodiffusione.
Informazioni generali
La meccanica del lavoro di precipitazione è simile al dispositivo di agglutinazione. Sotto l'influenza del siero di tipo immunitario, l'antigene, che è già entrato nella reazione, riduce il suo grado di dispersione. Una condizione importante è la trasparenza sia del siero che dell'antigene.
Puoi migliorare la registrazione della reazione se sovrapponi gli antigeni agli anticorpi. Di conseguenza, è possibile osservare la comparsa di precipitati sotto forma di anello. Questo fenomeno è chiamato precipitazione ad anello e si realizza in tubi speciali aventi un diametro da 2,5 a 3,5 mm. Uno degli esempi più comuni di reazione di precipitazione è la diagnosi di antrace.
La precipitazione consente di determinare il livello di tossigenicità di una coltura di difterite in agar.
Durante la reazione in esamesi verifica la precipitazione di complessi antigenici e anticorpi. La precipitazione è un fenomeno immunologico che consente di determinare la quantità di anticorpi nel siero del sangue di una persona malata o vaccinata e degli animali.
Conseguenza della titolazione
È importante sapere che i dati ottenuti dalla titolazione del metodo sopra non sono quantificabili. Per creare e analizzare una valutazione quantitativa del numero di anticorpi contenuto, M. Heidelberger e E. Kabat hanno sviluppato una speciale tecnica di reazione, che si basa sulla ricerca e identificazione della zona di equivalenza. La miscelazione del numero di età degli antigeni con un volume costante di antisiero porta ad un aumento del precipitato inizialmente formato, e poi di nuovo diminuisce a causa dell'aumento della capacità di dissolvere i complessi antigenici. Determinando la quantità di anticorpi nei supernatanti contenuti in ciascuna provetta, puoi scoprire che un certo numero di piatti con anticorpi mancherà di liquido. Qui, rispetto ad altre provette, si formerà il precipitato più grande. Grazie a ciò e alla sottrazione del precipitato proteico antigenico dal valore totale delle proteine, è possibile ottenere il valore esatto degli anticorpi contenuti nel volume del siero specifico oggetto di studio. Inoltre, la quantità di molecole proteiche del precipitato è determinata dalla quantità di azoto o utilizzando metodi colorimetrici.
Valutazione dei valori
La stima dei valori di precipitazione in metodologia diagnostica dovrebbe tenere conto della possibilità della presenza nel siero immunitario di un anticorpo che non ha la proprietà della precipitina, da cui ne consegue che il precipitato stesso potrebbe non essere formatosi dopo aver reagito con gli antigeni. L'elenco di tali molecole include anticorpi incompleti e alcune specie del gruppo delle globuline gamma-A.
La reazione di precipitazione in condizioni di laboratorio trova la sua applicazione in vari tipi di modificazioni. Ad esempio, la reazione di termoprecipitazione viene utilizzata per rilevare antigeni batterici di botulismo, antrace, ecc., che non subiscono denaturazione termica. A differenza della precipitazione ad anello, questo tipo di reazione utilizza i filtrati del materiale in questione allo stato bollito.
L'analisi della reazione di precipitazione in una miscela complessa non consente di caratterizzare le proprietà dei singoli elementi della miscela. In questi casi, una persona ricorre al metodo di precipitazione in agar e usa anche l'immunoelettroferesi.
Precipitazioni diffuse
In quest'area di ricerca esiste il concetto di reazione di precipitazione diffusa (RPD). Si basa sulla capacità di diffondere nel gel di anticorpi e antigeni solubili. La diffusione è la capacità di una molecola di una certa sostanza di penetrare nelle molecole di un' altra, che è causata dal movimento termico.
Il gel è un sistema di tipo disperso in cui la fase liquida è distribuita uniformemente nella fase solida. Molto spesso, per tale reazione viene utilizzato gel di agar.
Dopo aver fornito i parametri, incondizioni in cui le molecole possono diffondersi l'una rispetto all' altra, il loro incontro sarà accompagnato dalla formazione di un complesso antigene + anticorpo. Tale neoplasia è in grado di diffondersi, essendo nel gel stesso, e precipiterà, assumendo la forma di una striscia che può essere rilevata ad occhio nudo. Se l'antigene e l'anticorpo sono omologhi, non si formerà alcuna banda.
La creazione delle condizioni in cui avverrà la diffusione mentre si è nello strato di agar comporta il versamento dei componenti, ma il numero totale di pozzetti e la loro posizione relativa è determinato da decidere il tipo di attività richiesta. RPD offre a una persona la capacità di rilevare e identificare virus isolati sconosciuti testando utilizzando sieri di anticorpi noti.
Applicazione
Le precipitazioni sono ampiamente utilizzate non solo nella diagnosi di malattie, ma trovano applicazione anche nella visita medica forense. È difficile immaginare un'analisi in cui sia possibile determinare la specie di sangue, parte di un organo o tessuto trovato su un'arma del crimine che non utilizza la reazione di precipitazione. Durante questo processo vengono utilizzati sieri precipitanti, ottenuti immunizzando vari animali e uccelli. È importante che il livello del titolo sierico non sia inferiore a 1:10000 e che abbia anche una specificità sufficiente. Dal punto rilevato di sangue o dalla sua crosta, viene prodotto un estratto per il fisico. soluzione, alla quale sarà ulteriormente espostasiero precipitante. In base a questa reazione, è possibile stabilire i tipi di proteine dei tessuti e degli organi sia dell'uomo che degli animali. L'ottenimento di estratti torbidi costringe a ricorrere alla precipitazione su agar.
Conclusioni
Analizzando le informazioni lette, possiamo concludere che le reazioni di precipitazione sono estremamente importanti per una persona, in quanto consentono di diagnosticare vari antigeni utilizzando anticorpi, questo fenomeno è ampiamente utilizzato anche nella visita medica forense e consente di identificare il tipo di sangue, tessuto o organo in relazione a un particolare soggetto. Esistono diversi tipi e metodi di precipitazione, che vengono utilizzati in base alle esigenze emergenti del problema da risolvere.
