Il termine "microscopia" ha radici greche. In traduzione, significa lo studio di oggetti utilizzando strumenti di alta precisione. Recentemente, la fluorescenza e la microscopia elettronica sono diventate sempre più popolari.
Risoluzione
In base ad esso, di norma, comprendono la distanza minima alla quale possono essere posizionati oggetti chiaramente distinguibili. Il grado di penetrazione nel mondo microscopico, la capacità di considerare la dimensione dell'elemento in studio dipenderà dalla risoluzione dell'apparecchiatura. Ad alto ingrandimento, i confini degli oggetti possono fondersi. Di conseguenza, ci sono alcuni limiti oltre i quali l'approssimazione degli elementi non ha senso.
Metodo di microscopia a luminescenza: meccanismo
Quando l'energia assorbita da una sostanza viene convertita in radiazione visibile, si verifica un bagliore. Si chiama luminescenza. Questo fenomeno è dovuto al fatto che alcune sostanze, sotto l'influenza della luce, iniziano a emettere raggi con una lunghezza d'onda diversa (solitamente grande). Inoltre, alcuni oggetti che, in condizioni di illuminazione normale, hanno una certacolore, sotto l'influenza dell'ultravioletto cambia colore.
Specifiche
Un oggetto che non può essere visto alla luce ultravioletta può emettere una lucentezza brillante se trattato con una sostanza speciale. In esso, gli elementi brillano di diversi colori nell'oscurità. La forza della radiazione è diversa, ma, di regola, è piccola. A questo proposito, la microscopia a fluorescenza è efficace in una stanza buia. Quando si utilizza questo tipo di studio, l'oggetto è visto nella luce che esso stesso emette. La composizione chimica dei tessuti e delle cellule influenzerà la qualità dello studio. La microscopia a fluorescenza è considerata uno studio istochimico in una certa misura.
Classificazione
La microscopia a fluorescenza può essere primaria o secondaria. In quest'ultimo caso, l'oggetto viene lavorato con speciali mescole che conferiscono un bagliore. La microscopia a fluorescenza primaria si basa sulla capacità dell'elemento di emettere luce.
Attrezzature
La microscopia a fluorescenza viene eseguita utilizzando una varietà di dispositivi. Il loro elemento principale è l'illuminatore. È dotato di una lampada UV. Inoltre, i dispositivi utilizzano una serie di filtri. In alcuni dispositivi, ci sono molte configurazioni diverse. A seconda del colore utilizzato per eccitare la luminescenza - ultravioletta o blu, viene posizionato un filtro appropriato tra la sorgente luminosa e l'oggetto in studio. Poiché il bagliore di un elemento microscopico è energeticamente più debole della luce eccitante, verrà catturato solo in una condizione. I raggi in eccesso dalla sorgente devono essere tagliati da un filtro giallo-verde. Si trova sull'oculare del dispositivo. L'effetto più pronunciato della luminescenza sarà quando il filtro interrompe completamente i raggi emanati dalla sorgente luminosa.
In cosa consiste un'installazione di luce visibile? Contiene una fonte di luce brillante e un microscopio biologico. Un filtro blu-viola è posizionato tra lo specchio del dispositivo e la lampada. Può essere FS-1, UFS-3 e così via. Il filtro giallo è posizionato sull'oculare del microscopio. Con il loro aiuto, la luce blu-viola cade sull'oggetto. Eccita la luminescenza. Ma questa luce può interferire con la visione del bagliore. Pertanto, sulla strada per l'occhio, viene tagliato da un filtro giallo. L'illuminazione è impostata secondo il metodo Koehler, con un'eccezione. Il diaframma del condensatore deve essere completamente aperto. Durante l'esame, è importante utilizzare un olio per immersione non fluorescente. Per ridurre il proprio bagliore, viene aggiunto nitrobenzene (2-10 gocce / 1 g).
Microscopia a luminescenza: applicazioni in microbiologia
I vantaggi di questo tipo di studio sono:
- Capacità di imaging a colori.
- Elementi autoemittenti ad alto contrasto su sfondo nero.
- Rilevamento e localizzazione di alcuni tipi di virus e microbi.
- La capacità di studiare in modo trasparente e opacoorganismi viventi.
- Studio dei processi vitali nelle loro dinamiche.
Va anche detto che la microscopia luminescente contribuisce allo sviluppo dei migliori metodi di isto- e citochimica, la diagnostica rapida.
